پیوندهای مفید
اخبار و اعلانات
آمار
| تعداد نشریات | 43 |
| تعداد شماره‌ها | 1,677 |
| تعداد مقالات | 13,681 |
| تعداد مشاهده مقاله | 31,715,816 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 12,532,248 |
جداسازی سودوموناسهای مقاوم به نانو اکسید روی از خاک و بررسی ژنهای دخیل در مقاومت | |||||||||||||||||||
| زیست شناسی میکروبی | |||||||||||||||||||
| مقاله 10، دوره 3، شماره 11، آبان 1393، صفحه 99-108 اصل مقاله (311.88 K) | |||||||||||||||||||
| نویسندگان | |||||||||||||||||||
| شهلا سلطانی نژاد* 1؛ محمد ربانی خوراسگانی2؛ محمد مهدی یعقوبی3؛ شهریار شاکری4 | |||||||||||||||||||
| 1دکتری میکروبیولوژی، دانشگاه اصفهان، ایران | |||||||||||||||||||
| 2دانشیار میکروبیولوژی، دانشگاه اصفهان، ایران | |||||||||||||||||||
| 3استادیار ژنتیک مولکولی، دانشگاه تحصیلات تکمیلیصنعتی و فناوری پیشرفته کرمان، ایران | |||||||||||||||||||
| 4استادیار میکروبیولوژی، دانشگاه تحصیلات تکمیلیصنعتی و فناوری پیشرفته کرمان، ایران | |||||||||||||||||||
| چکیده | |||||||||||||||||||
| مقدمه: نانو ذرات اکسید روی به طور وسیع در صنعت، لوازم آرایشی، بهداشتی و پزشکی استفاده میشوند. بررسیهای زیادی بر روی فعالیت ضد میکروبی نانو ذرات متمرکز انجام شده است، اما اطلاعات اندکی در مورد مقاومت باکتریها در برابر آنها در دسترس است. مواد و روشها: جدایههای سودوموناس مقاوم به نانو اکسید روی از نمونههای خاک جمع آوری شده از مناطق مختلف از جمله معدن مس سرچشمه کرمان جداسازی شد. جدایه انتخاب شده بهوسیله تحلیل توالی ژن 16S rRNA شناسایی شد. اثر نانو ذرات اکسید روی بر روی سرعت رشد باکتری بررسی شد. یونهای محلول روی آزاد شده از نانو ذرات اکسید روی بهوسیله اسپکتروفتومتری جذب اتمی اندازهگیری شد. بخشی از توالی ژن مقاوم به روی (czcC) تکثیر شده و بهوسیله تحلیل فیلوژنتیکی توالی پروتئین آن شناسایی شد. نتایج: تحلیل فیلوژنتیکی بر اساس توالی ژن 16S rRNA نشان داد که جدایه انتخاب شده Pseudomonas sp. ZnO-2 است. الگوی رشد جدایه انتخاب شده در حضور تمام غلظتهای نانو اکسید روی مورد بررسی، مشابه نمونه کنترل (کشت فاقد نانو ذرات) بود که نشان میدهد نانو ذرات اکسید روی رشد جدایه جداسازی شده را تحت تاثیر قرار نداده است. PCR ژن czcC و الکتروفورز نشان داد که Pseudomonas sp. ZnO-2 دارای این ژن است. بحث و نتیجهگیری: در طی فرآیند تکامل، میکروارگانیسمها مکانیسمهای مقاومت به فلزات خود را برای سازگاری با محیطهای مختلف بهبود میبخشند. وجود ژن czcC بهوسیله PCR تایید شد که شباهت زیادی با ژنهای مقاوم به روی در باکتریهای دیگر نشان میدهد. | |||||||||||||||||||
| کلیدواژه‌ها | |||||||||||||||||||
| نانو ذرات اکسید روی؛ فلزات سنگین؛ مقاومت؛ سودوموناس | |||||||||||||||||||
| اصل مقاله | |||||||||||||||||||
|
مقدمه نانو ذرات اکسید فلزی در مقیاس وسیع برای کاربردهای صنعتی و مصارف خانگی تولید میشوند. تولید و استفاده زیاد از این نانو ذرات، خطر آلودگیهای محیطی را افزایش داده و آلودگی خاک، باکتریهای محیطی را تحت تاثیر قرار خواهد داد(1). نانو ذرات اکسید روی (ZnO) در صنایع الکترونیک، نساجی، لوازم آرایشی، اسپریها، پلاستیک، رنگها، فیلمهای محافظ سودوموناس جنسی از گاما پروتئوباکترهاست. باکتری گرم منفی، میله ای، هوازی، بدون اسپور، متحرک با تاژک قطبی، اکسیداز و کاتالاز مثبت است (7 و 8). این جنس شامل گونههایی با عملکردهای اکولوژیکی، اقتصادی و پزشکی است که برخی اعضای آن قادرند مواد شیمیایی آلوده کننده را در محیط متابولیزه کنند. در نتیجه میتوانند در تجزیه زیستی[5] استفاده شوند(9). در حالی که فعالیت ضد میکروبی نانو ذرات به فراوانی بررسی شده اما اطلاعات اندکی در مورد مکانیسم مقاومت باکتریها در برابر این ذرات وجود دارد. بر این اساس هدف از این پژوهش، جداسازی و غربالگری جدایههای سودوموناس مقاوم به نانو اکسید روی از خاک و شناسایی ژنهای دخیل در مقاومت است.
مواد و روشها جمع آوری نمونه نمونههای خاک (حدود 100 گرم از هر نمونه) از مناطق مختلف از جمله معدن مس سرچشمه، مجتمع مس شهید باهنر و محوطه تصفیه خانه آب و پساب کرمان، از عمق 20 سانتیمتری در فلاسکهای استریل جمع آوری و برای مطالعات بیشتر در 4 درجه سانتیگراد نگهداری شدند (10). تهیه محلول ذخیره[6] نانو اکسید روی[7](ZnO) نانو ذرات پودری اکسید روی (سیگما، آمریکا) با درجه خلوص بیشتر از 99 درصد، اندازه 35 تا 45 نانو متر، رنگ سفید شیری و تقریباً کروی شکل استفاده شد. این نانو ذرات بهوسیله XRD[8] تحلیل شدند. محلول ذخیره بهوسیله سوسپانسیون نمودن نانوذرات در آب دو بار تقطیر استریل برای تهیه غلظت نهایی 100 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر فراهم شد. این سوسپانسیون به مدت 30 دقیقه با w 30 اولتراسونیک شده تا این که سوسپانسیون کلوییدی یکنواختی فراهم شد (11 و 12). این محلول در 4 درجه سانتیگراد نگهداری شد. غنیسازی و جداسازی سویههای سودوموناس از خاک یک گرم از هر نمونه خاک در 10 میلی‌لیتر آب مقطر استریل سوسپانسیون شده، یک دقیقه ورتکس شد. این سوسپانسیون در rpm 2000 به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شده، 1/0 میلی‌لیتر از سوپرناتانت رقیق شده به پتری دیشهای استریل حاوی محیط PIA[9] دارای غلظت 100 میکروگرم بر میلی‌لیتر از ZnO اضافه شد. محیطها به مدت 72 ساعت در 30 درجه سانتیگراد انکوبه شدند. کلونیهای مجزا بر روی محیط انتخابی PIA کشت مجدد داده شده تا کشت خالص و یک دستی از هر کلونی فراهم شود (13).
غربال گری سودوموناسهای مقاوم به ZnO برای جداسازی جدایههای مقاوم، نمونهها بر روی محیط PIA دارای غلظتهای مختلف ZnO (100 تا 500 میکروگرم بر میلی‌لیتر) غربال شدند. کشتها 3 تا 5 روز در 30 درجه سانتیگراد گرمخانهگذاری شدند. تمام آزمایشها با سه تکرار انجام شد. سنجش سرعت رشد باکتری در حضور غلظتهای مختلف ZnO به منظور بررسی اثر نانو ذرات اکسید روی بر سرعت رشد باکتری، غلظتهای مختلف آن(100 تا400 میکروگرم بر میلی‌لیتر) استفاده شد. فلاسکهای استریل دارای 50 میلی‌لیتر محیط کشت آبگوشت LB به مدت 30 دقیقه پس از اضافه نمودن ZnO اولتراسونیک(Tecna 6، ایتالیا) شد. فلاسکها با حدود- 105CFU بر میلی‌لیتر از کشت تازه باکتری تلقیح شده و در 30 درجه سانتیگراد با دور rpm 200 گرمخانهگذاری شدند. میزان رشد باکتری با اندازهگیری جذب نوری در نانومتر 600 اندازهگیری شد. نمونه کنترل مثبت شامل (فلاسک دارای محیط کشت و نانو ذرات، بدون تلقیح باکتری) و نمونه کنترل منفی شامل (فلاسک دارای محیط کشت و باکتری، بدون نانو ذرات) است(14). تعیین بیشترین غلظت قابل تحمل MTC[10] نانو اکسید روی برای تعیین MTC نانو اکسید روی، جدایه مورد نظر بر روی محیط MHA[11] دارای غلظتهای مختلف نانو اکسید (100 تا 900 میکروگرم بر میلی‌لیتر) کشت داده شده و رشد آن پس از گذشت 48 ساعت در 30 درجه سانتیگراد بررسی شد. MTC بالاترین غلظتی از نانو اکسید است که اجازه رشد پس از 48 ساعت گرمخانهگذاری در 30 درجه سانتیگراد را میدهد (15). اندازهگیری رهاسازی یونهای روی از ZnO سوسپانسیون تازه ای از ZnO با غلظتهای 100 و 200 میلی‌گرم بر لیتر فراهم شده، اسیدیته آن6 و 7 تنظیم شد. این سوسپانسیون به مدت یک ساعت به ملایمت تکان داده شده، سپس 30 دقیقه در g 15000 سانتریفیوژ شد. مایع رویی جمع آوری شده، دوباره به مدت 30 دقیقه سانتریفیوژ شد. غلظت یون روی محلول در مایع رویی ثانویه بهوسیله اسپکتروفتومتری جذب اتمی شناسایی جدایههای باکتریایی تکثیر ژن 16S rRNA و تحلیل الکتروفورزی DNA ژنومی باکتری مورد نظر با استفاده از کیت استخراج DNA (سیناژن با شماره کاتالوگ DN8115 C) استخراج شد. دو پرایمر مورد استفاده برای تکثیر ژن 5´-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3´ -3´AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-5´(16) برنامه PCR با 30 سیکل تکثیر در دستگاه ترموسایکلر به این شکل انجام شد: جداسازی اولیه دو رشته در دمای 94 درجه به مدت 5 دقیقه، تکثیر بخشی از ژن مسئول مقاومت به روی (czcC) پس از استخراج DNA ژنومی، بخشی از ژن czcC بهوسیله PCR تکثیر شد. پرایمرهای مورد استفاده عبارتند از: پرایمر رفت با توالی 5´-CGTCGAGGTAGGCAATCA-3´ برنامه PCR با 35 سیکل تکثیر در دستگاه ترموسایکلر به این شکل انجام شد: جداسازی اولیه دو رشته در دمای 94 درجه به مدت 5 دقیقه،
نتایج تعیین ویژگیهای ریختشناسی نانو ذرات اکسید روی شکل 1 الگوی XRD نانو ذرات اکسید روی را نشان میدهد که با دادههای استانداردی که قبل گزارش شده (22) همخوانی دارد و حالت کریستال بودن آن را تایید میکند.
شکل 1- الگوی XRD نانو ذرات ZnO
جداسازی و غربال گری سویههای مقاوم در این پژوهش، 5 جدایه مقاوم به نانواکسید روی از خاک جداسازی شد. از میان آنها، 4 جدایه در محیط PIA دارای200 میکروگرم بر میلی‌لیتر نانو اکسید روی و 2 جدایه در محیط دارای300 میکروگرم بر میلی‌لیتر نانو اکسید روی رشد کردند. در نهایت، جدایه ZnO-2 (جدا شده از خاک معدن مس سرچشمه) بالاترین مقاومت را نسبت به نانوذرات ZnO نشان داد که برای بررسیهای بیشتر انتخاب شد. بررسی منحنی رشد باکتری در حضور غلظتهای مختلف ZnO شکل 2 منحنی رشد جدایه Pseudomonas sp. ZnO-2 در حضور غلظتهای مختلف نانو ذرات ZnO را نشان میدهد. الگوی رشد این باکتری در غلظتهای مختلف ZnO مشابه نمونه کنترل (بدون نانوذرات ZnO) است که نشان میدهد نانو ذرات رشد این باکتری را تحت تاثیر قرار نداده است.
شکل2- منحنی رشدPseudomonas sp. ZnO-2 در حضور غلظتهای مختلف نانو اکسید روی
تعیین MTC نانو ذرات روی بررسی بالاترین غلظت قابل تحمل نانو ذرات اکسید روی در جدایه Pseudomonas sp. ZnO-2 نشان داد که این جدایه قادر به رشد در غلظتهای بالا تا میزان رها شدن یون روی از نانو ذرات ZnO در جدول 1 نشان داده شده است. نتایج نشان میدهد که مقادیر در خور توجهی از یونهای روی سریع در محیط رها میشوند. برای رهاسازی یونهای روی، بر هم کنش معنیداری بین غلظت و اسیدیته وجود دارد.
جدول1- رها سازی یونهای محلول روی از سوسپانسیون 100 و 200 میلی‌گرم بر لیتر نانو ذرات ZnO
تحلیل فیلوژنتیکی وابستگی فیلوژنتیکی جدایه Pseudomonas sp. ZnO-2 بهوسیله تحلیل توالی ژن 16S rRNA مشخص شد. تحلیل فیلوژنی ژن 16S rRNA روشی دقیق و سریع برای شناسایی موقعیت فیلوژنی باکتریهاست. طول کامل این ژن (حدود 1500 جفت باز) تعیین توالی شده و درخت فیلوژنی رسم شد. شکل 3 ارتباط فیلوژنتیکی این باکتری را با باکتریهای دیگر نشان میدهد.
شکل 3- درخت فیلوژنی رسم شده بر اساس توالی ژن 16S rRNA که وابستگی جدایه Pseudomonas sp. ZnO-2 را با جدایههای دیگر نشان میدهد.
تحلیل فیلوژنتیکی ژن czcC پرایمرهای استفاده شده برای تکثیر ژن czcC تقریبا یک باند 150 جفت بازی را ایجاد کردند (شکل 4). توالی نوکلئوتیدی به توالی پروتئین ترجمه شده و با توالیهای پروتئین CzcC باکتریهای دیگر مقاوم به روی همتراز[17] شد. درخت فیلوژنی بر اساس توالی پروتئین CzcC رسم شد (شکل 5). مقایسه توالیها، تشابه زیادی با ژن مقاومت به روی در باکتری سودوموناس پوتیدا نشان داد.
شکل 4- الکتروفورز ژل آگاروز محصول PCR ژن czcC 1- نشانگر DNA 2- ژنczcCجدایه Pseudomonas sp. ZnO-2
شکل 5- درخت فیلوژنی رسم شده بر اساس پروتئین CzcC
بحث و نتیجهگیری آلودگی خاک با فلزات سنگین و ذرات نانو در حال گسترش است که به طور گسترده در نتیجه فعالیتهای بشر مانند معدن کاوی، کشاورزی و صنعت اتفاق میافتد. معدن مس سرچشمه در جنوب غربی استان کرمان طی فعالیت خود در سالهای متمادی باعث آلودگی خاکهای سطحی با فلزات سنگین شده است. این آلودگی میتواند اثرات مهمی بر روی جمعیت میکروبی بومی داشته باشد. برای مثال فلزات سنگین و نانو ذرات میتوانند ترکیب گونهای و تولید مثل میکروبی را محدود کنند. همچنین، ممکن است فعالیتهای میکروبی مثل تثبیت ازت را تحت تأثیر قرار دهند (23). پژوهش حاضر، با هدف شناسایی جدایههای سودوموناس بومی که توانایی مقاومت در برابر نانوذرات اکسید روی را داشته باشند، شروع شد. محیطهای آلوده به فلزات سنگین منابع بالقوهای برای جداسازی این باکتریهای مقاوم هستند. آزاد شدن یون روی از نانو ذرات ZnO دیمکپاو همکاران[xviii] نشان دادند که رهاسازی یونهای محلول از ZnO وابسته به اسیدیته و جرم است. به گونهای که همچنان که غلظت افزایش پیدا میکند، میزان یون بیشتری آزاد میشود و یونهای کمتری در اسیدیته 7 نسبت به اسیدیته 6 رها میشود که با نتایج این پژوهش همخوانی دارد (1). پژوهشگران زیادی نشان داده اند که رها شدن یونها از نانو ذرات به سمیت آنها کمک میکند (1، 24 و 25). برای مثال چکل و همکاران[xix] گزارش کردند که آزاد شدن یون روی از نانو ذرات ZnO به فعالیت ضد باکتریایی نانو اکسید روی کمک میکند (26). همچنین، دیمکپا و همکاران نقش بیولوژیکی رها شدن یونها از ذرات نانو را نشان دادند به گونهای که سمیت این ذرات هنگام استفاده از کلاتهکنندههای اختصاصی یونها از بین رفت (1). بنابراین، با توجه به این نتایج ممکن است مکانیسم مقاومت به نانو ذرات روی نیز همان مکانیسمهای مقاومت به فلز روی باشد. تکثیر ژن دخیل در مقاومت در طی فرآیند تکامل، میکروارگانیسمها مکانیسمهای مقاومت به فلزات خود را برای سازگاری با محیطهای مختلف بهبود میبخشند. باکتریها مکانیسمهای مختلفی برای مقاومت در برابر عوامل ضد میکروبی دارند. محصولات کد شده بهوسیله ژنهای مقاوم نیز میتوانند سمیت فلزات سنگین را کاهش داده و یا حذف کنند (23). برای مثال، آنزیمهای کد شده بهوسیله ژنهای مسوول مقاومت، عوامل ضد میکروبی را قبل از این که اثر گذار باشند، تخریب میکنند. همچنین، باکتریها امکان دارد پمپهای انتشار به خارج[xx]را کسب نمایند که عوامل ضد میکروبی را قبل از این که به محل هدف برسند، دفع کنند (27). در این پژوهش، مقایسه توالی بخشی از پروتئین CzcC تشابه زیادی با باکتریهای دیگر نشان داد. تحلیل درخت فیلوژنی CzcC نشان داد که Pseudomonas sp. ZnO-2 شاخه فیلوژنتیکی با Pseudomonas putida DOT- T1E تشکیل میدهد. بهترین مکانیسم مقاومت به روی سیستم czc است که مقاومت به کادمیوم، روی و کبالت را باعث میشود. این سیستم به عنوان آنتیپورتر کاتیون/ پروتون پمپ کننده کاتیونها به خارج سلول عمل میکند. CzcC یک پروتئین غشای خارجی است. CzcB و CzcA در فضای پری پلاسمی گسترده هستند و از رها شدن کاتیونهای آزاد جلوگیری میکنند. CzcD در غشای سیتوپلاسمی قرار دارد (28). با توجه به نتایج این پژوهش میتوان نتیجه گرفت که خاکهای آلوده به فلزات سنگین منابع بالقوهای برای جداسازی جدایههای مقاوم به ذرات نانو هستند. از طرفی چون نانوذرات اکسید فلزی مقدار در خور توجهی یونهای فلزی محلول را در محیط آزاد مینمایند که به سمیت آنها کمک میکند، میتوان بیان کرد که ممکن است یکی از مکانیسمهای مقاومت میکروارگانیسمها در برابر ذرات نانو نیز همان مکانیسمهای مقاومت در برابر فلزات باشد. تشکر و قدردانی از تمام افرادی که ما را در انجام این پژوهش یاری کردند، بهویژه مسوولین محترم آزمایشگاه بیوتکنولوژی پژوهشگاه علوم و تکنولوژی پیشرفته و علوم محیطی دانشگاه تحصیلات تکمیلیصنعتی و فناوری پیشرفته کرمان تشکر و قدردانی میشود.
[1]- Escherichiacoli O157:H7 [2]- Listeria monocytogenes [3]- Salmonella [4]- Staphylococcus aureus [5]- Bioremediation [6]- Stock solution [7]- Zinc Oxide Nanoparticles [8]- X-ray diffraction analysis (PANalytical XPert Pro Eindhoven, Netherlands) [9]- Pseudomonas Isolation Agar [10]- Maximum Tolerable Concentration [11]- Muller Hinton Agar [12]- Bioneer [13]- http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi [14]- http://www.ebi.ac.uk [15]- Accession number [16]- Kimura’s two-parameter model [17]- align [xviii]- Dimkpa et al [xix]- Scheckel et al [xx]- Efflux pumps | |||||||||||||||||||
| مراجع | |||||||||||||||||||
|
References (1) Dimkpa CO, Alyssa C, Britt DW, McLean JE, Anderson AJ. Responses of a soil bacterium, Pseudomonas chlororaphis O6 to commercial metal oxide nanoparticles compared with responses to metal ions. Environmental pollution. 2011; 159: 1749- 56. (2) Mueller NC, Nowack B. Exposure modeling of engineered nanoparticles in the environment. Environmental Science and Technology. 2008; 42(12): 4447-53. (3) Aruoja V, Dubourguier HC, Kasemets K, Kahru A. Toxicity of nanoparticles of CuO, ZnO and TiO2 to microalgae Pseudokirchneriella subcapitata. Science of the Total environment. 2009; 407 (4): 1461-68. (4) Jones N, Ray B, Ranjit KT, MannaAC. Antibacterial activity of ZnO nanoparticle suspensions on a broad spectrum of microorganisms. FEMS Microbiology Letters. 2008; 279 (1): 71–76. (5) Jin T, Sun D, Su JY, Zhang H, Sue HJ. Antimicrobial efficacy of zinc oxide quantum dots against Listeria monocytogenes, Salmonella enteritidis and Escherichia coli O157:H7. Journal of Food Science. 2009; 74(1): M46–M52. (6) Wu B, Huang R, Sahu M, Feng X, Biswas P, Tang YJ. Bacterial responses to Cu-doped TiO2 nanoparticles. Science of the Total Environment. 2010; 408 (7): 1755–58. (7) Krieg NR. Bergey`s manual of systematic bacteriology. 2nd ed. Baltimore: Williams & Wilkins; 1984. (8) Barnali S, Celin A, Joshi SR. Pseudomonas: A versatile bacterial group exhibiting dual resistance to metals and antibiotics. African Journal of Microbiology Research. 2010; 4 (25): 2828-35.
(9) Tanase AM, Trasca C, V assu T, Olteanu A, Pelinescu D, Csutka O, et al. Phylogenetic Analysis on 16S Ribosomal DNA of Pseudomonas Strains from Oil Polluted Soil. Romanian Biotechnology Letters. 2009; 14 (6): 4779-85. (10) Sevgoli E, Corali G, Gizir AM, Sangun MK. Investigation of heavy metal resistance in some bacterial strains isolated from industrial soils. Turkish Journal of Biology. 2010; 34: 423-31. (11) Ashutosh K, Alok KP, Shashi SS, Rishi S, Alok D. Cellular uptake and mutagenic potential of metal oxide nanoparticles in bacterial cells. Chemosphere. 2011; 83 (8): 1124–32. (12) Yanping X, Yiping H, Peter LI, Tony J, Xianming S. Antibacterial activity and mechanism of action of Zinc Oxide nanoparticles against Campylobacter jejuni. Applied and Environmental Microbiology. 2011; 77 (7): 2325–31. (13) Anyanwu CU, Nwachukwu ON. Heavy Metal Resistance in Bacteria Isolated from Contaminated and Uncontaminated Soils. International Journal of Research in Chemistry and Environment. 2011; 1(1): 173-8. (14) Khan S, Mukherjee A, Chandrasekaran N. Silver nanoparticles tolerant bacteria from sewage. Journal of Environmental Sciences. 2011; 23 (2): 346-52. (15) Margeay M, Nies D, Schlegel HG. Alcaligenes eutrophus CH34 is a facultative chemolitotroph with plasmid bound resistance to heavy metals. Journal of Bacteriology. 1985;162: 328-34. (16) Loffler FE, Sun Q, Li J, TiedjeiJM. 16S rRNA Gene-Based Detection of Tetrachloroethene- Dechlorinating Desulfuromonas and Dehalococcoides Species. Applied and Environmental Microbiology. 2000; 66(4): 1369-74. (17) Hall T. Bio Edit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT. Nucleic Acids Symposium Series. 1999; 41: 95-98. (18) Tamura K, Peterson D, Peterson N, Stecher G, Nei M, Kumar S. MEGA5: Molecular Evolutionary Genetics Analysis using Maximum Likelihood, Evolutionary Distance, and Maximum Parsimony Methods. Molecular Biology and Evolution. 2011; 28 (10): 2731-2739. (19) Altschul SF, Gish W, Miller W, Myers EW, Lipman DJ. Basic local alignment search tool. Journal of Molecular Biology. 1990; 215 (3): 403–10. (20) Felsenstein J. Confidence limits on phylogenies: an approach using the bootstrap. Evolution. 1985; 39 (4): 783-91. (21) Kimura M. A simple method for estimating evolutionary rates of base substitutions through comparative studies of nucleotide sequences. Journal of Molecular Evolution. 1980; 16 (2): 111–20. (22) Peng X, Palma Sh, Fisher NS, Wong SS. Effect of morphology of ZnO nanostructures on their toxicity to marine algae. Aquatic Toxicology. 2011; 102:186–96. (23) Wei G, Fan L, Zhu W, Fu Y, yu J, Tang M. Isolation and characterization of the heavy metal resistant bacteria CCNWRS33-2 isolated from root nodule of Lespedeza cuneata in gold mine tailing in China. Journal of Hazardous materials. 2009; 162 (1): 50-6. (24) Wu B, Wang Y, Lee YH, Horst A, Wang ZP, Chen DR, et al. Comparative eco-toxicities of nano-ZnO particles under aquatic and aerosol exposure modes. Environmental Science and Technology. 2010; 44: 1484- 9. (25) Wang H, Wick RL, Xing B. Toxicity of nanoparticulate and bulk ZnO AL2O3 and TiO2 to the nematode Caenorhabditis elegans. Environmental Pollution. 2009; 157 (4): 1171- 7. (26) Scheckel KG, Luxton TP, El-Badawy AM, Impellitteri CA, Tolaymat TM. Synchrotron speciation of silver and zinc oxide nanoparticles aged in a kaolin suspension. Environmental Science and Technology. 2010; 44 (4): 1307- 12. (27) Fred CT. Mechanisms of antimicrobial resistance in bacteria. American Journal of Medicine. 2006; 119 (6A): S3- S10. (28) Choudhury R, Srivastava S. Zinc resistance mechanisms in bacteria. Current Science. 2001; 81(7): 7- 10.
| |||||||||||||||||||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 1,671 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 1,102 |
|||||||||||||||||||